女性尖锐湿疣是一种传染性疾病，由人乳头瘤病毒(HPV)感染所致。迄今，HPV难于用传统的病毒培养及血清学技术检测，主要实验诊断技术是核酸杂交。近年来发展的基因诊断(PCR)方法具有特异、敏感、简便、快速等优点，为HPV检测开辟了新途径。本文中就将针对基因诊断女性尖锐湿疣的方法为您介绍。
(一)标本的采集及处理
1.标本的采集和预处理：用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时，将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中，用PBS离心(3000g，10min)洗涤2次，沉积细胞重悬于1mlPBS中，取0.5ml细胞悬液抽提DNA。
2.标本核酸的提取：按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液(10mmol/L Tris-HCl，pH 7.4，10mmol/L EDTA，150mmol/L NaCl，0.4%SDS，1.0mg/ml蛋白酶K)37℃下处理过夜;且等体积酚/氯仿(1:1)，氯仿/异戊醇(24:1)各抽提2次;加1/10体积3mol/L NaAc(pH 5.2)及2.5倍体积无水乙醇置-20℃ 2h或过夜沉淀DNA;加1体积乙醇洗涤1次;用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/L Tris-HCl，pH 8.0，1.0mmol/L EDTA)溶解DNA，37℃温育30min。
(二)PCR扩增
引物设计和合成：HPV基因组可分为早期区(E)和晚期区(L)，每区含一系列开放读码框架(ORF)。序列分析表明，各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1，该引物与HPV 6、11、16、18及33型有互补序列，也可扩增其它型HPV。
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