恙虫病的诊断和检查

　　1.流行病学资料：应注意发病前4～20天内是否去过恙虫病流行区，是否曾在户外工作，露天野营或在灌木草丛中坐，卧等，同时，还应注意流行季节，当地本病的流行情况等。

　　2.临床表现：突然发病，畏寒或寒战，高热，食欲缺乏，颜面潮红，浅表淋巴结肿大，肝脾肿大，斑丘疹，并可发现特征性焦痂或溃疡，对怀疑患本病的患者应十分注意寻找焦痂或溃疡，它多位于肿大，压痛的淋巴结附近。

　　3.实验室检查：

　　(1)血象：外周血液白细胞数多减少或正常，重型患者可稍增高，分类常有核左移现象。

　　(2)血清学检查：

　　①外-斐反应：

　　外-斐反应亦称变形杆菌凝集试验，患者血清中抗恙虫病立克次体的抗体能与变形杆菌OXK抗原起凝集反应，为诊断提供依据，病程第1周 末仅少数(30%左右)阳性，第2周末为75%左右，第3周可达90%左右，效价可达1∶160～1∶1280，第4周即开始下降，至第8～9周多转为阴 性。

　　②补体结合试验：

　　阳性率较高，特异性较强，且持续阳性时间较长，可达5年左右，需选用当地多见株作抗原，也可采用多价抗原，因不同株的恙虫病立克次体的抗原性可有较大差异。

　　③免疫荧光抗体试验：

　　用间接免疫荧光抗体试验(indirect immunofluorescent antibody test，IFAT)检测患者血清中特异性抗体，在病程的第1周末开始出现阳性，第2～3周末达高峰，60天后逐渐下降，但可持续数年，有病后10年检测 仍呈阳性的报告。

　　④斑点酶免疫测定：

　　用各种血清型的恙虫病立克次体或部分蛋白质作为抗原，吸附在硝酸纤维膜上作斑点酶免疫测定(dot enzyme immunoassay，dot-EIA)，检测患者血清中各血清型的特异性IgG和IgM抗体，该法敏感度高，特异性强，可区分各种血清型。

　　⑤酶联免疫吸附试验与酶免疫测定：

　　以基因重组技术表达的恙虫病立克次体分子量为56×103的蛋白质作为抗原，用酶联免疫吸附试验(enzyme- linked immunosorbent assays，ELISA)与酶免疫测定(enzyme immunoassay，EIA)检测患者血清中抗恙虫病立克次体的IgG和IgM抗体，其敏感度为86%～88%，特异性为84%～90%。

　　(3)病原学检查：

　　①病原体分离：

　　常用小鼠作恙虫病立克次体分离，可取患者的血液接种小鼠腹腔，每只接种0.5ml，多在接种后第7～9天发病，解剖濒死的小鼠可发现双肺充血，水肿，肝，脾，淋巴结充血肿胀，出现胸腔积液和腹水，取腹水涂片，腹膜，肠系膜，肝，脾或肾印片，干后用吉姆萨染色镜检(放大1000～1600倍)，可于单核细胞和巨噬细胞的胞质中发现紫红色，呈团丛状分 布的恙虫病立克次体，当一个恙虫病立克次体侵入细胞后，在适宜的条件下可在局部胞质中繁殖为一团，故常呈团丛状分布，若用抗恙虫病立克次体抗体作免疫荧光试验，在荧光显微镜下可见细胞内有黄绿色的荧光。

　　②分子生物学检查：

　　根据恙虫病立克次体编码其分子量为56×103的主要表膜蛋白抗原的基因核苷酸序列，有人设计了各血清型间共同和不同的引物，用套式聚合酶链反应(nested polymerase chain reaction，nested-PCR)检测Gilliam，Karp，kato，kawasaki和kuroki五个血清型的相应基因，具敏感度高， 特异性强的特点，认为可用于本病的诊断并鉴定血清型。