保健食品调节肾动脉狭窄型高血压

　　1　材料和方法

　　1.1　受试物　大蒜制剂，淡黄色粘稠液体。人体推荐剂量为每日1.8 g/60 kg BW。本实验设低、中、高三个剂量组，分别为0.15、0.3、0.9 g/kg BW，相当于人体剂量的5倍、10倍、30倍。另设高血压模型对照组和正常对照组。

　　1.2　动物　Wistar大白鼠，雄性，150～200 g，由上海医科大学实验动物部提供。

　　1.3　器材　RBP-Ⅰ型大鼠尾压心率测定仪，由北京中日友好临床医学研究所生产。U形银夹，内径0.2 mm。

　　1.4　方法　肾动脉狭窄型高血压模型　室温保持25℃左右，开启大鼠尾压心率测定仪电源，约30 min后，大鼠固定器和预热箱内温度达到38℃的测试要求。将正常大鼠若干，逐个放入尾压心率测定仪的恒温箱内，预热10～15 min，依次取出并装入合适的固定网套内，测出清醒大鼠正常血压值，然后随机分为正常对照组(假手术组)和高血压造模组(手术组)。腹腔注射3%戊巴比妥钠，仰卧位固定，剪去腹部手术野毛，皮肤消毒后于剑突下1.5 cm沿腹正中线切开皮肤及肌层，右食指伸入腹腔摸着左侧肾脏，左食指从腹部外侧配合将肾脏轻轻挤出，用浸有生理盐水的棉花包住，固定于腹外。分离肾蒂筋膜，沿肾静脉下方分离肾动脉。高血压手术组用内径0.2 mm的U形银夹套在肾动脉上使其狭窄，右肾保持不动。假手术组同样操作，但不套银夹。术后缝合肌肉与皮肤创口，并作消毒护理。4周后测2组大鼠血压，选出第二组中血压升高大于4 kPa的大鼠，再分成4组：肾性高血压模型对照组和低、中、高剂量试样组，每组8只。试样组采用灌胃方式，分别给予不同剂量试样28 d，正常对照组以蒸馏水灌胃。实验末测5组大鼠的体重、血压和心率。

　　2　结果

　　手术4周后，(2)(3)(4)(5)套U形银夹组的血压显著高于正常对照组(假手术组)，说明肾动脉狭窄型高血压模型已成功建立。服用受试物28 d后，三剂量组血压都有所下降，与高血压模型对照组相比，中、高剂量组有显著性差异，说明受试物有明显的降低高血压的作用(见表1)，也提示方法灵敏可靠。

　　表1　受试物对肾性高血压大鼠血压的影响

　　组　别 动物数 只 实验前血压 实验后血压

　　(1)正常对照 8 14.4±1.4 14.8±1.3

　　(2)模型对照 8 22.7±1.4① 23.3±1.3

　　(3)低剂量 8 23.2±1.8① 22.6±2.0

　　(4)中剂量 8 22.9±1.4① 20.8±1.3②

　　(5)高剂量 8 23.4±1.4① 20.5±2.4②

　　注:①与正常对照组相比 P<0.05 ②与模型对照组相比 P<0.05

　　各组大鼠在模型建立后，生长情况良好，体重增长(见表2)和心率(见表3)均无显著性差异，表明此方法稳定，降血压的同时不影响大鼠的其它生理指标。

　　表2　受试物对肾性高血压大鼠体重的影响

　　组　别 动物数 只 体重 增重

　　实验前 实验后

　　正常对照 8 232.0±14.5 280.0±15.6 47.8±5.3

　　模型对照 8 232.5±21.0 278.8±36.6 46.3±21.5

　　低剂量 8 227.5±16.3 268.3±15.2 40.8±5.9

　　中剂量 8 255.0±39.7 297.5±41.8 42.5±11.4

　　高剂量 8 252.0±36.0 299.3±52.0 47.3±25.1

　　表3　受试物对肾性高血压大鼠心率的影响

　　组　别 动物数 只 心率 min-1

　　正常对照 8 364±32

　　模型对照 8 375±43

　　低剂量 8 385±53

　　中剂量 8 362±55

　　高剂量 8 359±57

　　3　讨论

　　在降压药物研究中，高血压动物模型的建立有多种方法，比如盐性高血压、自发性高血压(SHR)、神经内分泌型高血压、肾动脉狭窄型高血压、肾外包扎型高血压等等。〔2〕而对于保健食品，用何种模型较为合适尚在探索中。我们经过反复试验，并与盐性高血压模型比较，认为肾动脉狭窄型方法有如下特点：(1)造模原理与临床继发性高血压病人的发病机理相似，即狭窄肾动脉可造成肾脏缺血，导致肾脏内肾素形成，进而增高血中血管紧张素的含量，使血压升高〔2〕(2)手术成功率高，二肾一夹型成功率为95%。(3)实验成本比SHR大鼠低，适合于保健食品试样多、动物用量大的特点。(4)盐性模型血压升高不显著，成功率较低，且停服盐水后，血压不稳定，而肾性模型手术后大鼠血压逐渐升高，到4周后，形成稳定的高血压，且维持时间长，更利于保健食品长期服用的特点。

　　在测量血压方面，有尾动脉间接测压法和直接插管测压法两种。〔3〕我们选用了前者，因为实验中我们发现它有两大优点：(1)测量简便灵敏。采用袖套法阻断鼠尾血流，配以鼠尾容积波的声光显示，可以同时读取血压和心率数据。(2)前者对大鼠无损伤。而后者必须先进行动脉插管手术，动物损伤严重，不宜长期给样，所以前者更适合保健食品长期灌胃给样的需要。

　　在实验过程中，我们注意到一些影响实验成功的因素。第一，U形银夹的内径要严格控制在0.2～0.25 mm，若肾动脉过度狭窄，会造成恶性高血压，大鼠手术后几天内便死亡。第二，分离肾动脉与肾静脉时，手术难度较大，若刮破肾静脉，会造成大量失血，影响动物存活率。第三，测量尾压时，要先将大鼠放入38℃预热箱，保温10～15 min，温度不同，血压也有差别。第四，大鼠不宜在固定器中关的时间太长，否则会引起动物烦躁不安，使血压升高。

　　4　参考文献

　　[1]　卫生部卫生监督司编.保健食品管理法规汇编.吉林：吉林科学技术出版社，1997，41～186

　　[2]　徐叔云，卞如濂，陈修主编.药理实验方法学.第2版.北京：人民卫生出版社，1994，818～819

　　[3]　国内卫生部药政司主编.新药(西药)临床前研究指导原则汇编.北京：1993，64～65