糖尿病肾病的早期实验诊断方法

　　糖尿病肾病(DN)是糖尿病(Diabetes Mellitus， DM)的严重并发症之一。随着糖尿病发病率的增加，DN患者日益增多，因其发病隐蔽，进展缓慢，如果任其发展，当临床上出现持续性蛋白尿时，肾脏病变已不属早期，肾脏已出现了不可逆的病变，再用药物也无法逆转。因此，早期发现糖尿病肾病有其十分重要的意义。现简要介绍三种糖尿病肾病的早期实验诊断方法。

　　一、尿微量白蛋白检测

　　(一)方法：竞争酶联遏制法。

　　(二)实验步聚：

　　1、用扑克制的抗菌素人白蛋白包被塑料板。

　　2、加入不同浓度的标准抗原或待测样品，37℃温育30分钟。

　　3、加入底物溶液和终止液，通过酶标仪比色，即可算出待测标本浓度。

　　(三)结论：

　　此法快速简便，非常适合临床常规使用。但是其缺点是DM患者中尿微量白蛋白的阳性率较低，在Ⅱ型糖尿病病人中，阳性率不足20%。

　　二、尿铜蓝蛋白检测

　　(一)方法：酶联免疫吸附测定法。

　　(二)实验步骤：

　　1、铜蓝蛋白抗体包被，冰箱过夜。

　　2、加入不同浓度的标准抗原或待测样品，37℃温育1小时。

　　3、加入酶标铜蓝蛋白抗体，37℃温育1小时。4、加入底物溶液和终止液，在酶标仪上读取A值，即可算出待测标本浓度。

　　(三)结论：

　　该方法进行了精确性和稳定性实验，方法比较稳定可靠。并对114名DM患者的尿铜蓝蛋白含量及尿微量白蛋白含量进行相关分析，两者呈正相关，且在尿微量白蛋白阴性的糖尿病病人中，仍有49。5%的病人尿铜蓝蛋白阳性。因此，尿铜蓝蛋白质检测很有可能成为DN早期的较第三诊断指标。

　　三、尿白蛋白片段的检测

　　(一)方法：免疫印迹法。

　　(二)实验步骤：

　　1、尿样与样品处理液等量混合，置沸水浴3分钟。2、聚丙烯酰胺凝胶电泳，每孔加样20μι，电压200V。3、将胶上的蛋白带转印到硝基纤维素膜上，转印电流340mA，2小时后取出，封闭1小时。4、加入白蛋白抗体和酶标白蛋白，冰箱过夜。5、加入显色液，出现蛋白带为阳性，未见蛋白带为阴性。

　　(三)结论：

　　通过实验得出凡是尿白蛋白阳性者，尿白蛋白片段也为阳性，而尿白蛋白阴性者中，仍有30%为尿白蛋白片段阳性。曾有人对后者进行随访观察，发现他们中有18%发展为尿白蛋白，蛋白阳性。因此，认为尿白蛋白片段具有更高的特异性和早期栓出率，能更早地发现DN患者。

　　综上所述，除尿微量白蛋白检测是目前人们较为公认的DN早期诊断指标外，其它两种都还在观察及研究中。目前国内外还没有建立尿铜蓝蛋白酶联免疫测定方法，市场上买不到试剂盒，其作用机理还待于进一步深入研究。免疫印迹法分析尿白蛋白片段，在我院已应用于临床，对尿白蛋白阴性者，再用本法检测分析，可以更有效地避免早期糖尿病肾病的漏诊，是预测肾脏病变的更为早期，更为灵敏的指标。