诊断支原体感染和诊断衣原体感染一样必需经过实验室检查，不能仅仅根据症状就作出诊断。目前诊断支原体感染用的是培养法和血清学检测法。
1、支原体培养。标本的取材男性为尿道内口约0.5cm以上，女性提倡子宫颈棉拭子取材，而不用尿培养。支原体的培养和鉴定是确诊支原体感染的单独方法。每种培养基都用酚红作标记，人型支原体和脲原体可使培养基变成粉红色。
诊断支原体感染的常用方法
2、支原体血清学鉴定。1984年开始使用一种微量的酶标免疫法，能检测支原体的8种血清型抗体。这对于诊断患者为哪一种支原体血清型感染是很有帮助的。但临床上，不必都作支原体血清型鉴定，通过支原体培养证明有支原体感染，马上积极治疗是非常必要的。
除此之外，临床诊断支原体感染还包括以下几种：
1、支原体感染感染：是指血清学检测阳性时，有发热及呼吸道症状，但无明显脏器受累、胸X线片正常。
2、支原体感染肺炎：有发热、咳嗽、呼吸困难及肺部罗音等临床征象，血清学检测阳性，胸X线片有片状阴影等改变。
3、支原体感染肺炎肺外并发症(肺外脏器受累)：除明确诊断MP感染外，同时可累及心、脑、肾、淋巴、血液系统等，并出现相应受累症状与体征，如出现胸腔积液、MP脑炎、感染后肾炎、心肌炎、血小板减少性紫癜，有的呈多脏器受累。MP血清学检测阳性。
4、支原体感染P血症：MP血培养费时2～3周，对实验室技术要求较高。但随着科技的发展，必将进一步一起临床医生的重视。
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