诊断支原体的5大利器

　　支原体可引起泌尿生殖道感染，并被认为是非淋球菌性尿道炎中仅次于衣原体的重要病原体。专家指出，取尿道分泌物、阴道分泌物作支原体培养才是检测衣原体感染与否最可信的方法。也可根据特异性抗体能阻止支原体的生长和代谢这一特性，利用患者血清进行代谢遏制试验。

　　诊断支原体的5大利器

　　1、生长遏制试验

　　特异性抗体能阻止支原体的生长和代谢。用直径为6mm-8mm的圆形灭菌滤纸片，以未稀释抗血清浸透后放入无菌平皿内，于4℃下干燥后待用。 吸取待检菌液0.5mL涂布于固体培养基上，置37℃使琼脂表面稍干燥。以无菌操作镊取抗血清纸片放于琼脂表面,培养4日-5日后,在低倍显微镜下观察滤纸片周围有无支原体生长。若滤纸片周围无菌落生长，出现抑菌圈大于2mm者表示该支原体与抗血清系同种免疫原，小于2mm判为异种。

　　2、分离培养方法

　　(1)液体培养基：支原体肉汤培养基80mL，马血清或小牛血清10mL，酵母浸液10mL,10 %尿素溶液0.5mL-1.5mL, 0.4%酚红溶液0.5mL,青霉素(使其在培养基中的浓度为500U/mL-2000U/mL,)用1N HCl 调pH值至5.5-6.5, 用小试管分装后置冰箱中备用，每管1.5-2.0mL。

　　(2) 固体培养基：在100mL 支原体肉汤培养基中，加入琼脂1.2-1.4g, ,高压灭菌后冷却到 50 ℃左右，逐一加入上述添加剂。摇匀，倒入无菌平皿中，待凝固后，置冰箱中备用。

　　3、代谢遏制试验

　　根据特异性抗体能阻止支原体的生长和代谢这一特性，可用病人血清进行代谢遏制试验。在加有抗血清的培养基中，支原体的代谢受到遏制，从而阻止了培养基的颜色改变。

　　代谢遏制试验也可用于检测感染支原体患者血清抗体的滴度。即将血清作10倍连续稀释后，滴入支原体培养液，并以不加血清的支原体试验管和不加支原体液的培养基管作对照。经37℃培养，不加抗血清的培养管支原体应生长良好，培养基变成红色(Uu或Mh)，未加支原体液培养基管颜色不变。未发生颜色变化的最高血清稀释度为代谢遏制试验的抗体滴度。

　　4、间接血凝试验

　　在一定条件下，抗体和相应抗原相遇，可形成抗原抗体复合物。这种复合物分子团很小,不能形成肉眼可见的反应。用经鞣酸处理的红细胞作载体，将抗原吸附在其表面，使红细胞致敏，待与相应的血清抗体相遇时，可出现肉眼可见的凝集现象。

　　5、分子生物学诊断方法

　　目前主要应用聚合酶链反应(PCR)法及DNA探针技术作诊断。前者具有高度特异性和敏感性、且快速、简便。但操作要求极为严格。聚合酶链反应的原理是DNA片段扩增，其中支原体引物的选择是PCR检测技术中的关键。1991年Willonghby 设计的引物来自脲酶基因。Zheng等(1995)用MB抗原基因引物对所有14个血清型的Uu均显示良好的PCR扩增效果，其敏感性较 Willonghby设计的脲酶基因引物更好。

　　温馨提示：夫妇双方重视性卫生，杜绝不洁性生活，对预防解脲支原体感染具有十分重要的意义。若在妊娠早期检测衣原体为阳性，此时则应及时治疗，以免对胎儿构成无法弥补的伤害。

　　【参考文献：《临床检验诊断手册》《高级临床技巧与查体诊断》】