对学术型干细胞培养基的方法和解释

　　国外研究分析报告中，在干细胞培养基的方法可以做出明确说明，以当前主要用于培养干细胞的无血清培养基配方需要我们每天补充培养基，并且利用周末至少自己需要通过更换一次培养基。随着社会越来越多的核心技术实验室和财团致力于使用人诱导性干细胞生成疾病模型，媒体，试剂和人力资本资源的成本问题变得过高。人类胚胎干细胞/ 诱导性干细胞培养基是基于小分子的培养基，可在周末无人培养干细胞，并允许隔日更换培养基，而不会造成损害干细胞的形态或长期功能。维持他们这种情况适度喂养方案的细胞表现出强大的细胞形成健康性，自发分化严重程度低，并表达了高水平的性标志物。

　　其中在培养基中培养具有干细胞的方法如下：

　　1.干细胞培养用包被板的制备

　　为了在培养中扩增人类胚胎干细胞和诱导干细胞，需要一个ecm凝胶基质(cc131)还是一个非异质的基质如 vtn 或 ecmatrix?- 511层粘连蛋白。以下是用ecm凝胶基质涂覆6孔板和培养瓶的一般指南:

　　1、在冰上解冻ECM凝胶基质(CC131)。将其保存在冰上，并使用预冷的培养基和移液管，以避免ECM试剂过早凝胶化。重要提示:为防止意外胶凝，请勿在高于15℃的温度下解冻ECM凝胶基质..

　　2、用冷的DMEM / F12(D6421)稀释ECM Gel Matrix 1:20。例如，向每0.5 mL ECM凝胶作为基质中加入9.5 mL冷DMEM / F12培养基，总体数量积为10 mL。根据自己所需的体积缩放。

　　3、用推荐容积覆盖培养皿(例如，在6孔板的每个孔上加1.5毫升)。通过旋转培养板，ecm 凝胶基质均匀分布在培养板表面。在室温下孵化至少1小时或2°8°c 过夜。如果没有立即使用，保持在2-8摄氏度的涂层培养皿，直到它准备好使用。备注: 如非即时使用，应以密封胶密封，以防蒸发，并可在摄氏2 ° 8度贮存一星期。

　　4、接种细胞前，将平板恢复至室温，除去包被液，加入适量胚胎干细胞诱导的干培养基(SCM130，SCM132)。重要提示:不要让烧瓶变干。

　　用于干细胞培养的 dispase ii 制备

　　储存在培养基中的人胚胎干细胞和诱导多能干细胞可以用Dispase蛋白酶酶促传代。Dispase II溶液(SCM133)是一种即用型1 mg\\u002FmL溶液，可与人胚胎干细胞和诱导干细胞的培养基一起用于人胚胎和诱导干细胞的培养和传代。