干细胞研究的基本方法

　　干细胞研究的分化是不可逆的，没有任何系统可以检测到一个单位从一个更加分化的部门回到以前分化较少的部门，造血系统包括增殖细胞和失去这种能力的细胞，并包含的元素，确保维持整个系统，长期称为干细胞。

　　根据定义，后者需要至少具有两个主要特性，与整个生物体的寿命相当的自我维持能力，以及分化成更成熟的细胞成分的能力，长期以来，研究造血干细胞的问题一直是推测性的，只有建立了一种克隆受辐照小鼠脾脏造血细胞的方法后，其实验研究才有可能实现。

　　注入致死剂量照射的小鼠中的少量骨髓遏制细胞被转运至各种经济造血组织器官，尤其是对于脾脏，引入的造血系统细胞的增殖从而导致造血灶的形成(集落)，散布在整个脾脏中，并以结节的形式从肉眼可以清晰可见，在移植后的7至10天内出现很多可容纳数百万个造血功能细胞。

　　平均每104个异基因骨髓细胞移植过程中形成一到三个集落，这对任何克隆方法都提出了关键问题，无论一个集落是由造血细胞形成的，还是由作为移植群体的一部分参与其克隆的细胞群组成的，结果表明，集落数量随着移植细胞数量的线性增加 ，这一事实是支持克隆起源的有力论据。

　　然而，注射细胞的数量和出现的菌落数量之间只有线性关系，这一事实不足以证明菌落的克隆起源。事实上，如果两种或两种以上的细胞类型共同参与集落的形成，而其中只有一种被限制在造血细胞的悬液中，在这种情况下，将会观察到导入细胞的数量与产生集落的数量之间的线性关系，并且会利用放射性标记的方法证明脾脏中集落的克隆特征。

　　为此研究目的，用250 rad的剂量辐照处理小鼠，并用大剂量的同系骨髓移植，然后用650rad的剂量可以再次通过辐照，在这些经济条件下，受体模型小鼠接受的总剂量为900拉德，这几乎使它们作为自己的集落形成一种细胞具有完全失活，而移植的细胞则接受了相对较低以及剂量的辐射(650拉德)，其中存在一些存活了下来， 与此同时，有很高的概率，一个重要细胞照射在我们这样的剂量，尽管它没有生存，耐某种社会稳定染色体畸变(染色体标记物)，这使得它能够合理确定它和它的后代。